Composition en Monosaccharides

Le profil de glycosylation d’une protéine d’intérêt peut être complété en déterminant la composition en monosaccharides des structures glycanniques présentes. Elle permet d’identifier la présence de sucres spécifiques comme le xylose et le
N-Acetyl galactosamine..

Description de l’analyse

Les monosaccharides neutres (glucose, N acetyl-glucosamine, galactose, N-acetyl-galactosamine, mannose, fucose) sont quantifiés par chromatographie d’échange d’anions haute performance couplée à la détection par ampérométrie pulsée (HPAEC-PAD) Cette technique permet de déterminer la quantité de chaque monosaccharide présent sur la protéine analysée.

Méthode

Quantification des monosaccharides neutres : Les monosaccharides libres sont obtenus par hydrolyse de l’échantillon avec 2M acide tri-fluoro-acétique ,4h  à 100°C. Après évaporation, l’échantillon est dissout dans de l’eau ultra pure et analysé sur colonne PA20 par chromatographie d’échange d’anions haute performance couplée à la détection par ampérométrie pulsée (HPAEC-PAD)..